Der Enzymimmunoassay- ELISA (der englische enzymgebundene Immunosorbens-Assay , wörtlich "Technik enzymgebundenes Immunosorbens", dh Enzymimmunoassay-Feststoffträgertechnik) ist eine Laboruntersuchung. Dieses Verfahren wird hauptsächlich verwendet, um das Vorhandensein eines Antikörpers oder eines Antigens in einer Probe nachzuweisen .
Diese Technik der biochemischen Analyse fällt in den allgemeineren Rahmen von immunenzymatischen Detektionstechniken (oder EIA für Enzymimmunoassays ), bei denen die Erkennung eines von einem spezifischen Antikörper untersuchten Antigens (oder umgekehrt eines von einem Antigen untersuchten Antikörpers) verfolgt wird durch eine Reaktion, die durch ein Enzym katalysiert wird, das eine gefärbte Komponente freisetzt, deren Menge spektroskopisch untersucht wird . Dazu wird das Antigen von einem kovalent an ein Enzym gekoppelten Antikörper erkannt (oder umgekehrt wird der Antikörper von einem markierten Antigen erkannt). Die Bindung des markierten Moleküls führt nach Verwendung eines chromogenen oder fluorogenen Substrats für das an den Antikörper gebundene Enzym zur Emission eines farbigen oder fluoreszierenden Signals. Diese Techniken sind zu entgegengesetzt werden radioimmunologischen Tests (RIA oder für Radio - Immunoassays ) , in dem die Kennzeichnung durch ein durchgeführte radioaktives Element , deren Strahlen Aktivität wird in Anzahl der Zerfälle pro Sekunde gemessen. Um die Implementierung der Technik zu erleichtern, insbesondere im Fall einer großen Anzahl von zu analysierenden Proben, wird der für das gewünschte Antigen spezifische Antikörper oder das vom gewünschten Antikörper erkannte Antigen mit dem verwendeten Träger verbunden, der damit bedeckt ist. daher der Name der Immunabsorptionstechnik. Es gibt verschiedene Variationen von Betriebsprotokollen, die es ermöglichen, die Spezifität oder Sensitivität der Antigenerkennung zu erhöhen (indirekter, Sandwich- oder kompetitiver ELISA).
Da der ELISA verwendet werden kann, um sowohl das Vorhandensein eines Antigens als auch das eines Antikörpers in einer Probe zu bewerten, ist er ein wirksames Instrument sowohl zur Bestimmung der Serumantikörperkonzentrationen (wie für den HIV-Test oder den HIV-Test. Nilvirus ), nur um das Vorhandensein eines Antigens nachweisen. Es hat auch Anwendungen in der Lebensmittelindustrie gefunden, um Lebensmittelallergene wie Milch , Erdnüsse , Baumnüsse und Eier nachzuweisen . Es ist ein einfacher, benutzerfreundlicher und kostengünstiger Test. Es ist durch die Verfügbarkeit spezifischer Antikörper begrenzt.
Um die Empfindlichkeit des Nachweises des Antigens zu verbessern, kann der Antikörper, der das gewünschte Antigen erkennt, nicht an ein Enzym gekoppelt sein, sondern spezifisch von einem zweiten Antikörper erkannt werden, der selbst an ein Enzym gekoppelt wird .
Das Enzym wirkt als Enhancer: Selbst wenn nur wenige an das Enzym konjugierte Antikörper gebunden sind, katalysiert das Enzym die Bildung vieler Signale, was diesen Test sehr empfindlich macht, aber auch die Anzahl falsch positiver Ergebnisse erhöht . Es ist daher logisch notwendig, Kontrollbohrungen bereitzustellen.
Die Schritte des sogenannten indirekten ELISA, der am häufigsten verwendet wird, um die Serumantikörperkonzentration zu bestimmen, sind:
Der Sandwich-ELISA ist eine weniger verbreitete (klinische) Variante dieser Technik, die zum Nachweis einer Antigenprobe im Serum oder einer anderen Probe verwendet wird. Diese Technik ist andererseits in der Forschung sehr verbreitet.
Der Prozess läuft in groben Zügen wie folgt ab:
Wie dargestellt, gibt es jedoch normalerweise einen zusätzlichen Schritt, die Zugabe von Nachweisantikörpern , um zu vermeiden, dass für jedes Antigen an das Enzym konjugierte Antikörper erzeugt werden . Die Verwendung eines gekoppelten Enzyms, das die Fc-Einheit anderer Antikörper erkennt, ermöglicht die Verwendung in einer Vielzahl von Situationen und reduziert die Kosten des Verfahrens.
Diese Variante ermöglicht den Test eines Antigens nach dem Prinzip der Bindungskonkurrenz:
Es besteht daher eine Konkurrenz zwischen den markierten Antigenen (in bekannter Menge) und den nicht markierten (in der zu bestimmenden Menge) um ihre Bindung an die fehlenden Antikörper. Je größer die Anzahl der zu testenden Antigene ist, desto größer ist ihr Anteil an den von den Antikörpern zurückgehaltenen Antigenen und desto schwächer ist das Signal. Wenn umgekehrt die Anfangskonzentration des Antigens niedrig ist, ist das Signal stark.
ELISA kann für quantitative oder qualitative Zwecke durchgeführt werden:
Direkter ELISA wird für den Assay verschiedener Proteine verwendet. Einige Beispiele aus Anwendungen in der medizinischen Pharmakologie: Schilddrüsenhormone, Arzneimittelkonzentration (zur Beurteilung der Compliance und / oder Anpassung der Dosierung ) usw.
Die bekannteste Anwendung für die breite Öffentlichkeit sind First-Line- HIV- Tests .
Die ELISA - Technik erlaubt den Nachweis von anti- HIV - Antikörper im Blutserum (daher der Begriff „seropositiv“ oder „seronegativ). Die Technik hochempfindlich ist ( die meisten Fälle erfaßt werden , und“ falsch - negative "(= negativen Tests , wenn der Patient seropositiv) sind fast auszuschließen, zumindest wenn der Test innerhalb von drei Monaten nach dem infektiösen Kontakt durchgeführt wird) und eine akzeptable Spezifität (eine geringe Rate an " falsch positiven " (= positiver Test durch Reaktion des Antikörpers mit einem unspezifischen Antigen) ). Im Falle einer positiven Anti-HIV-Serologie sollten die Proben jedoch Bestätigungstests wie Western Blot unterzogen werden , bei denen eine auf Elektrophorese basierende Technik verwendet wird und deren Fehlerrate extrem niedrig ist.