Fluoreszenzmarker in der PCR

Viele Fluoreszenzmarker werden in der PCR ( Polymerase-Kettenreaktion ) verwendet.

Historisch

Aus Gründen der Übersichtlichkeit entsprechen die Daten der Erstveröffentlichung auf dem Gebiet und es werden nur die Erstautoren zitiert, die vollständigen Quellenangaben befinden sich im Kapitel "Bibliographie".

• 1880  : Erster synthetischer Nährboden für fluoreszierende Mikroorganismen von Hueppe F.
• 1964  : Nachweis durch Fluoreszenz von DNA, die mit BET assoziiert ist, von Lepecq JB.
• 1972  : Erste DNA-Migration auf Elektrophorese-Gel von Aaij C.
• 1986  : Erste öffentliche Veröffentlichung über PCR von Kary Mullis (Nobelpreis für Chemie 1993).
• 1989  : Erster Nachweis von PCR-Produkten mit BET (und nicht durch Radioaktivität) durch Xu ZD.
• 1992  : Erfindung der Echtzeit-PCR durch Higuchi R.
• 1994  : Patentierung von SYBR Green I durch Molecular Probes.
• 1995  : Erster Einsatz von SYBR green zum Nachweis eines PCR-Produkts von Schneeberger C.
• 1995  : Erfindung der Hydrolysesonden durch Livak KJ.

Unspezifische Marker

DNA-Interkalantien

Kleine Groove-Marker

Asymmetrische Cyanidrine

Spezifische Sequenzmarker

Hybridisierungssonden

Hydrolysesonden

Die Sonde wird unter Verwendung eines Donors ( Fluorescein , dessen Anregungswellenlänge 530 nm beträgt) und eines "Quenchers" konstruiert, der auf ein zu der interessierenden DNA-Sequenz komplementäres Polynukleotid gepfropft ist.

Molecular Beacons-Sonden

Skorpionsonden

Literaturverzeichnis

Französische Bibliographie

• Hueppe F. Studien über blaue Milch. Cohns Beiträge zur Biologie der Pflanzen. 1880; 3

• Lepecq JB, Yot P, Paoletti C. Interaktion zwischen Ethidiumhydrobromid (BET) und Nukleinsäuren (AN). Spektrofluorometrische Studie. [Wechselwirkung von Ethidiumbromhydrat (BET) mit Nukleinsäuren (NA). Spektrofluorimetrische Studie.] CR Hebd Seances Acad Sci. 1964; 259: 1786-9.

• Poitras E, Houde A. Echtzeit-PCR: Prinzipien und Anwendungen. Rezensionen in Biologie und Biotechnologie (Kanada). 2002; 2 (2): 2-11

• Tsé C, Capeau J. Quantifizierung von Nukleinsäuren durch quantitative Echtzeit-PCR. Ann Biol Clin (Paris). 2003; 61 (3): 279–93

Englische Bibliographie

• Aaij C, Borst P. Die Gelelektrophorese von DNA. 1972. Biochim Biophys Acta. 10. Mai, 269 (2): 192-200.

• Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultane Amplifikation und Detektion spezifischer DNA-Sequenzen. 1992. Biotechnologie, 10: 413–7.

• KJ Livak, JA Flood, J. Marmaro, W. Giusti, K. Deetz. Oligonukleotide mit Fluoreszenzfarbstoffen an entgegengesetzten Enden stellen ein gelöschtes Sondensystem bereit, das zum Nachweis von PCR-Produkt und Nukleinsäurehybridisierung nützlich ist. 1995. PCR-Methoden Appl. 4: 357-362.

• Mullis K, Faloona F, Scharf S, Saiki R, Horn G, Erlich H. Spezifische enzymatische Amplifikation von DNA in vitro: die Polymerase-Kettenreaktion. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 1986; 51 Pt 1: 263-73.

• Schneeberger C, Speiser P, Kury F, Zeillinger R. Quantitativer Nachweis von Reverse-Transkriptase-PCR-Produkten mittels einer neuartigen und sensitiven DNA-Färbung. 1995. PCR-Methoden Appl. Feb.; 4. (4): 234-8.

• Xu ZD, Yu YJ, Hsie AW, Caskey CT, Rossiter B, Gibbs RA. Deletionsscreening am Hypoxanthin-Guanin-Phosphoribosyltransferase-Locus in chinesischen Hamsterzellen unter Verwendung der Polymerase-Kettenreaktion. 1989. Teratog Carcinog Mutagen; 9 (3): 177-87.