In-situ-Hybridisierung

Die Hybridisierung in situ (HIS) ist eine Labortechnik zur Lokalisierung einer Sequenz bekannter einzelsträngiger Nukleotide ( RNA oder DNA ) eines histologischen Gewebeschnitts.

Diese Technik basiert auf der Komplementarität der Kernbasen zwischen ihnen (wenn man tatsächlich zwei komplementäre umgekehrte Einzelstränge in dasselbe Medium legt, kommen sie natürlich zusammen, um eine Helix zu bilden).

Um ein DNA- oder RNA-Molekül lokalisieren zu können, muss man also:

  1. denaturieren Sie es durch Erhitzen (die doppelsträngige (helikale) Sequenz wird einzelsträngig);
  2. Auswahl einer zur Zielsequenz komplementären Sonde;
  3. Markieren Sie die Sonde (damit sie lokalisiert und sichtbar gemacht werden kann).

Sondenmarkierung

Sie können die Sonde markieren mit:

HIS ist auch durch Elektronenmikroskopie unter Verwendung einer kolloidalen Goldmarkierung mit mehreren möglichen Korngrößen ( 0,8 bis 20  nm ) erreichbar.

Fazit

Das In-situ-Hybridisierungsverfahren besteht aus der Verwendung einer fluoreszierenden, radioaktiven usw. Sonde, die spezifisch eine komplementäre Nukleinsequenz wie eine gewünschte Messenger-RNA erkennt. In diesem Fall bindet es an die Messenger-RNA, wenn es in der Zelle vorhanden ist. Das Vorhandensein eines fluoreszierenden oder radioaktiven Signals usw. zeigt dann, dass die Sonde gut auf ihrem Ziel fixiert ist. Letzteres wird daher sichtbar.

Siehe auch

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Anmerkungen und Referenzen